详细介绍: Western Blot检测技术服务实验步骤概述
1. 组织取材:组织块称重
2. 利用液氮、研钵粉碎组织块
3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA),PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃
4. 加入PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),冰上孵育30分钟
5. 移入离心管4℃ 约20,000 g(约15,000转)15分钟
6. 上清液为细胞裂解液可分装-20℃保存
7. 进行Bradford比色法测定蛋白质浓度
8. 取相同质量的细胞裂解液(体积*蛋白质浓度),并加等体积的2×电泳加样缓冲液
9. 沸水浴中3分钟
10. 上样
11. 电泳(浓缩胶20mA,分离胶35mA)
12. 电转膜仪转膜(100mA 40分钟)
13. 膜用丽春红染色,胶用考马斯亮蓝染色
14. Westernblot 试剂盒显色
15. 分析比较记录
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